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第一问答网»论坛 › 中问网 › 问答 › 10微升pcr标准体系

10微升pcr标准体系

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查看11 | 回复3 | 2008-11-20 23:49:00 | 显示全部楼层 |阅读模式
如题
大家做PCR10微升体系时各种成分都加多少啊？
效果怎么样？
效果好的话请分享下！
万分感谢！

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千问 | 2008-11-20 23:49:00 | 显示全部楼层
这个不是一概而论的也没有所谓的标准可言模板浓度不一样就可造成其他所有成分的不一样不同的引物不同的退火温度不同的量建议做PCR之前先优化体系可建一正交试验表确定各组分的最佳组合...
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千问 | 2008-11-20 23:49:00 | 显示全部楼层
那个和你用的试剂有关啊，dNTP浓度，模板引物浓度，模板种类（比如扩增小麦基因组就可以把模板浓度提高到拟南芥的10倍），引物特异性，buffer里有没有镁离子，tap酶质量等等都有影响。不好说啊...
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千问 | 2008-11-20 23:49:00 | 显示全部楼层
我原来做过的优化体系：双蒸水 5.7510×buffer1Mg2+ 0.6dNTP 0.8Primer1
0.4Primer2
0.4DNA模板
1Taq酶
0.05...
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