请帮我把这个翻译成中文

显示全部楼层 · 2008-5-21 21:10:00

重组肝素酶（的R -肝素）。的R -肝素有人使用宠物系统（ 21 ），其中的表达是由噬菌体T7号聚合酶。东道国大肠杆菌菌株BL21中（ DE3 ）中包含了染色体复制的T7号聚合酶基因控制下的lacuv5 。表达是诱导异丙基的F3三维-硫代。二，建构旨在表达肝素酶在宠物系统。第一，建设包括本土肝素领导人序列。第二，建设开始与序列读会见， gln22 ， gln23 ， lys24 ， lys2s ， ser26 .... 该会见了残留之前添加gln22引入起始密码子。我和无损检测的BamHI限制用地附加上5 '两端的N端和C端引物，分别。楼heparinum基因组DNA被用来作为模板10规模的后续聚合酶链反应周期（见扩增PCR产物），以产生改性肝素i产品。 PCR产物分离正如上面所讨论和集中使用centricon个P - 100 （ amicon ）在5000 xg 20分钟。扩增产品是治疗klenow片段的DNA聚合酶（新英格兰biolabs ）为15分钟，并与T4的DNA聚合酶（新英格兰biolabs ）为10分钟。 PCR产物，是孤立于1琼脂糖凝胶电泳如上文所述。该钝的PCR片段，集中使用centricon个P - 100和结扎20霭仪议员的形状记忆合金的I -消化质粒pUC18 （法玛西亚）（ 19 ）。结扎混合物，然后利用变换dh5a主管细胞（ gibco /肝/生活技术）所建议的那样，制造商。亚克隆肝素的PCR片段，切除从质粒pUC18消化与我和无损检测的BamHI ，凝胶纯化，然后结扎宠物- 3A型质粒（简化在无损检测，我和网站的BamHI和凝胶纯化）使用T4的DNA连接（新英格兰biolabs ）。结扎的混合物，然后用变换dhsa主管细胞。质粒载有肝素酶I基因在PET - 3A型分离，纯化，并用来改造宿主细胞的表达（ DE3 ）中（ novogen ，威斯康辛州麦迪逊）。

千问 · 2008-5-21 21:10:00

再组合Heparinase (r-Heparinase)。使用宠物系统(21)， r-Heparinase被表达了，其中噬菌体T7聚合酶驾驶表示。主人大肠埃希氏菌张力BL21 (DE3)包含T7聚合酶基因的一个染色体拷贝受lacUV5的控制。异丙基f3D THIOGALACTOSIDE导致表示。二修建被设计用宠物系统表达heparinase。第一修建包括当地heparinase前导序列。第二修建开始了以读见面的序列， Gln22， Gln23， Lys24， Lys2s， Ser26…. The遇见的残滓在Gln22之前增加介绍起始密码子。 Nde我和BamHI制约站点被添附了在N-和C终端底漆上的5个'末端，分别。引起修改过的heparinase我产品， F. heparinum genomic脱氧核糖核酸为10个scaled-up PCR周期被用于，当模板(参见PCR产品的放大作用)。 PCR产品被隔绝了如上所述和集中使用在5000 x g的Centricon P-100 (Amicon) 20 min。放大作用产品对待了与脱氧核糖核酸聚合酶的Klenow片段我(新英格兰Biolabs) 15的极小和与T4脱氧核糖核酸聚合酶(新英格兰 Biolabs) 10 min。 PCR产品在琼脂糖胶凝体如上所述被隔绝了。直言的PCR片段被集中了使用Centricon P-100，并且绑扎与20 ng Sma我消化了pUC18 (Pharmacia) (19)。结扎术混合物然后被用于变换DH5a能干细胞(GIBCO/BRL/Life技术)，如建议使用由制造商。 Subcloned heparinase PCR片段从pUC18被切除了由与Nde的消化我，并且BamHI，形成胶冻被净化的，然后被绑扎的宠物3a质粒(预先消化在Nde我和被净化的BamHI站点和胶凝体)使用T4脱氧核糖核酸连接酶(新英格兰Biolabs)。结扎术混合物然后被用于变换DHSa能干细胞。包含heparinase的质粒我基因在宠物3a被隔绝，被净化了，并且使用变换寄主细胞BL21 (DE3) (Novogen， Madison， WI)。

千问 · 2008-5-21 21:10:00

伱疯了吗？

千问 · 2008-5-21 21:10:00

你傻啊?