目前一般的PCR产物大小是多少呢，是不是上1.5kb的序列就不好P出来了呢

显示全部楼层 · 2010-11-30 13:39:53

我的5'端重复序列相当多，设计得到的PCR产物因该是1.5Kb左右，但是跑胶验证的才750bp ，各位大侠帮我出出主意，咋能得到比较完整的序列

千问 · 2010-11-30 13:39:53

如果重复序列比较多，还是请选择再延长一点5’段，避免引物错配。一般的PCR体系用来扩增800bp以内的片段效果还可以，上了1000bp，我们都推荐使用LATaq酶，或者其他长片段酶，并延长退火时间，保证长片段可以完整复制。请你查查你的序列，看看750bp处是否有容易与引物错配的序列，如果没有，延长退火时间、降低退火温度试试；如果有，降低退火温度或者从新设计引物吧。

千问 · 2010-11-30 13:39:53

500-2K的比较多一般来说2K以上就算长片段PCR了…普通的PCR酶活性、错配什么的问题就严重了所以这个时候要考虑买贵点的酶了…偶实验室用的TaKaRa的，ExTaq扩4K以内的没问题的，更贵的有个给长片段PCR专用的酶LATaq，号称能P 31K的，偶只拿来P过8500的一个片段，效果很不错