3~4Kb的基因连接到载体上需要注意哪些细节问题?向各位讨教！谢谢！

显示全部楼层 · 2010-6-19 22:43:02

我试过感受态DH5a、HB101
载体用过PMD19、PMD18、PMD20还有TOYOBO公司的Plus
但是没有一次连上的
而且大多数时候菌都长的很少还基本是蓝斑

千问 · 2010-6-19 22:43:02

1.与载体连接时，加大目的基因DNA量，以提高与载体的连接效率，而且可以按倍数扩大连接反应体积，如25ul加大到50ul2.保证你的感受态细胞效率没问题，必要的时候可以做个阳性对照（加没有酶切的质粒载体）3.转化过程中的冰浴要用碎冰加水，以保证温度，从热水浴中取出感受态后要迅速放入冰浴中。