实时荧光定量PCR的一点问题

显示全部楼层 · 2010-7-19 11:08:56

定量PCR实验步骤（以mRNA为例）：
1. 设计实验方案：例如对样品、实验组和对照组的一个实验流程设计
2. 引物和探针的设计和合成
3. 抽提RNA，测定提取的RNA的浓度
4. 反转录PCR
5. 定量PCR
6. 数据分析
为什么在步骤中要抽提RNA，并要反转录PCR 请详细解释
为什么不能直接扩增 mRNA而要反转录之后扩增cDNA?

千问 · 2010-7-19 11:08:56

实时定量目的就在于测定样品mRNA水平的含量啊！要获取扩增反应之初的模板量，必然要先提取总RNA，用多聚T引物将全部的mRNA反转录得到cDNA作为模板，再通过后续检测得出结果。

千问 · 2010-7-19 11:08:56

这样可以测量某个基因的表达量实时荧光定量PCR的实验设计是根据你自己实验需要而定，并不是非要抽提RNA。你也可以用质粒DNA等做模板。从你的实验需求出发