【紧急求助】在做Real-time PCR实验时需要做SYBR Green RT-PCR预实验不？做这个实验有什么意义？

显示全部楼层 · 2011-2-10 23:34:21

做这个试验无非是看看有没有扩增曲线，但是由于SYBR Green本身存在的非特异性，所以即使有曲线也不能说明什么。看加样量，也完全没有必要。起始量1-2微克RNA扩增30-40个循环就可以。普通PCR跑胶看引物特异性最好

千问 · 2011-2-10 23:34:21

Real-time PCR可以选择做SYBR green或者直接使用Taqman probe。一般不需要做预实验。SYBR green和其他几种方法的区别，你可以看这里http://www.easylabs.com.cn/show.asp?id=262

千问 · 2011-2-10 23:34:21

SYBR Green是做real-time pcr常用的染色剂。如果不是熟手，每次做real-time pcr前最好做内参如18s确定基线和每个样品的上样量，也可先做半定量pcr