您好！！！请教您一下。目的基因跟载体片段连接后成重组质粒，那里面的那些溶液会影响接下来的酶切鉴定吗

显示全部楼层 · 2011-11-11 07:48:55

就是把目的基因和载体片段连接起来的那个连接体系里面的溶液，我接下来要坐酶切鉴定，会对其有影响吗？如果有影响，如何排除？期待您的回答！！！谢谢~~~~~

千问 · 2011-11-11 07:48:55

应该没有影响吧赞同

千问 · 2011-11-11 07:48:55

这个你当百度里的都是生物学教授吗？教授都是抵制百度的您这个太高端了不如问问导师吧既然是实验就要实验嘛不如取少量做了试试赞同

千问 · 2011-11-11 07:48:55

将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，首先碱基互补配对结合，两个黏性简单的说，重组质粒是基因表达载体的一种。很大的区别。赞同

千问 · 2011-11-11 07:48:55

你刚连接完就来酶切检测？看看分子克隆的书啊，亲~连接产物先转化到大肠杆菌中，比如top10，让菌在LBagarplate上生长16hrs，然后挑取单克隆，在2mlLB中培养起来（8hrs），少量抽提质粒后再用限制性内切酶进行酶切检测，将含有正确重组质粒的菌大量培养，抽取大量质粒~连接完就酶切，连接酶和限制酶会互相抑制，而且即使切开了，你跑胶也看不到的。。。。望采纳~赞同

千问 · 2011-11-11 07:48:55

我不知道还有这样做的哦，应该是连接之后，先做转化，然后再LB培养基上培养，挑菌进行摇菌，然后鉴定，是阳性的提质粒，然后酶切鉴定。赞同

千问 · 2011-11-11 07:48:55

楼上说的都基本正确，一般不会连接完直接作酶切。因为连接体系量太少，需要转化扩增，也方便鉴定和保存。如果硬要直接酶切，我觉得肯定会有影响，至少也要抽提一下DNA再做下步反应来自：求助得到的回答