有别人构建好的含有目的基因的表达载体质粒，但是只知道目的基因的mRNA序列，如何做PCR检测目的基因？

显示全部楼层 · 2011-6-9 12:55:14

第一个办法，如果你有这个载体的通用引物，可以用这俩通用引物做PCR，然后电泳观察条带的大小，如果条带和你的mRNA的大小相近（应该是略大于mRNA的，因为带有了小部分的载体序列），那就说明这里边是插入目的基因的。第二个办法，如果你能知道这个基因插入位点的酶切位点是什么的话，可以做双酶切来做鉴定，之后跑电泳看切出来的条带大小是否符合，注意如果切得完全的话应该是两条带，后边较大的是载体，前边的是你的mRNA。如果没有通用引物但是有这个mRNA的两端引物，有人可以用这俩引物来PCR，但是这个方法不推荐，因为可能有没连接进去的rna污染会出现假阳性，因此一般还要配合酶切鉴定。...

千问 · 2011-6-9 12:55:14

你这个基因想必是含有内含子了？是不是啊？如果已经不含内含子了，那就直接根据mRNA设计引物都可以的。一般设计15-20 bp。...

千问 · 2011-6-9 12:55:14

根据mRNA序列对应的dna序列设计引物。只要批出目的片段就可以确定。...

千问 · 2011-6-9 12:55:14

逆转录成DNA，就可以啦...