如何增加PCR产物?

显示全部楼层 · 2008-10-17 17:26:49

我得PCR扩增循环数是30个，扩增体系是15微升，其中NTP的浓度是1.5，引物和酶都是1，模板是1.2，镁离子的浓度是1.0。能扩出目的条带，但是琼脂糖电泳条带不是很亮，即目的条带的量不够，不能用于测序。后来也考虑减少循环数到25个，但是反而效果更不好，连目的条带都没有。也增加到35个循环，还是不理想。现在不知道原因在哪？

千问 · 2008-10-17 17:26:49

用的是哪个公司的试剂盒？taq酶有没有问题？自带的buffer里面有Mg2+吗？有可能引物特异性不高PCR产物较少也有可能产物有，但目标基因分子量较小，导致电泳效果不好不能测序是对方公司说的？琼脂糖电泳都能跑出来了应该够量了吧实在不行多做几管，收集在一起用PCR产物回收试剂盒浓缩...

千问 · 2008-10-17 17:26:49

有可能你的模板质量不高，加大模板的量。产物量不高不能降低循环数，只能增加，还有你用的是什么公司的酶啊？我们一般20UL体系，酶的量不超过0.5 ul,酶多了，也会有抑制作用的！...

千问 · 2008-10-17 17:26:49

你模板量是多少？1.2微升？你模板浓度是多少？大概折合后是多少纳克？按你说的这种情况很可能原因是由于模板量较少引起的DNA稀释的时候不要稀释太多加的时候体积不要变，提高浓度就可以了最后跑胶的时候点样可多点一点...