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分离mRNA

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3 | 2016-7-1 22:18:38 | 显示全部楼层 |阅读模式

为了克隆某个真核细胞的蛋白质基因，研究人员更愿意先从组织中分离它的mRNA，这样得到这个基因就不难了，为什么？
（注：希望从事生化教学的专业人员进行做答。且注意严谨、精确，切勿大篇幅粘贴网站信息）。

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千问 | 2016-7-1 22:18:38 | 显示全部楼层

分离的原理简单的来说就是利用mRNA的3’末端的polyA尾，流过寡聚（dT）纤维素柱层，两者在高盐缓冲液的作用下，特异的结合。真核生物mRNA有特征性的结构，即具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的poly(A)尾巴——绝大多数哺乳动物细胞的3’端存在20~300个腺苷酸组成的poly（A）尾，通常用poly（A+）表示，这种结构为真核mRNA分子的提取、纯化，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼脂糖亲合层析分离纯化mRNA的理论基础就在于此。
一般mRNA分离纯化的原理就是根据mRNA 3’ 末端含有多poly(A)尾巴结构特性设计的。当总RNA流经寡聚（dT）（即oligo(dT)）纤维素柱时，在高盐缓冲...

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千问 | 2016-7-1 22:18:38 | 显示全部楼层

真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼脂糖亲合层析分离纯化mRNA的理论基础就在于此。
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千问 | 2016-7-1 22:18:38 | 显示全部楼层

因为在真核细胞的DNA有许多内含子（内含子是基因内的间隔序列,不出现在成熟的RNA分子中,在转录后通过加工被切除。大多数真核生物的基因都有内含子。）即不表达的片段。
又因为人类克隆真核细胞的蛋白质，需要的是表达的基因，成熟的mRNA上没有内含子的遗传信息。这样节省了科学家的时间。...

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