DNA提取失败的原因？

显示全部楼层 · 2009-6-5 13:10:36

目前我在做叶蜂DNA提取的实验，由于本人学艺不精DNA提取失败了，请教各位大哥大姐们，失败的原因有哪些？？急急急急急！！！！！！
第一天：采用的是水浴法，先剪下叶蜂的胸部加三百微升CTAB，再捣碎十分钟到二十分钟，然后水浴 65摄氏度 4小时，在加等体积异戊醇：酚：氯仿摇匀，10000转/min离心机离心15分钟，取上清液，记下取出上清液量加等体积的异戊醇：酚：氯仿摇匀10000转/min离心10分钟，取出上清液，记下取出量加1/10体积的3mol/LNaAc PH值5.2和预冷的2.5倍体积的无水乙醇混匀，-20摄氏度保存过夜

第二天：取出-20摄氏度保存提取液，摇匀，13000转/min离心10min，弃上清液（能看见白色沉淀），再加入70%的C2H5OH漂洗,再离心条件跟上面一样时间改为离心5min,弃上清液，再漂洗一次，保存自然干燥

干燥完成后，加五十微升TE充分溶解，-20摄氏度保存备用。
就这些步骤，麻烦帮忙分析下，谢谢了！

千问 · 2009-6-5 13:10:36

看到白色沉淀的都不是好DNA，全是蛋白渣子。一个是操作问题，比如捣碎充分了吗？苯酚氯仿作用时间是不是太长了，你摇了多久？你都没有说清楚。二是试剂问题，确认别人用过并且成功后再用，要么自己配制。乙醇体积少一点。两倍体积。另外最后一点：你怎么知道DNA提取失败了？电泳没有条带？还是PCR扩增失败？...

千问 · 2009-6-5 13:10:36

啥信息都没有，怎么分析？原因多的是。方法，步骤，试剂！...