高中生物-基因工程

显示全部楼层 · 2009-5-18 01:30:22

我们正好做过双酶切，呵呵是这样的，因为我们需要在切下来之后做连接，不能保持它一直都是一个“切口”的状态，如果载体你只切一个口，目的基因也切这么个口，那么连接的时候就混乱了，可能自身闭合，也可能连成长串但是如果载体切两个不同的口，目的基因也切这么两个口，那么连接的时候就可以1对1的把目的基因和载体给连上来同一目的基因不同酶切下来的时候，其实两端带了一些无关的碱基的（也可以理解成冗余部分，专门拿来切的。。。呵呵）条件的话，就是两种酶的切点不能太近，至少要隔10来个碱基，实验起来双酶切可以同时做的（如果可以用同样的缓冲液），不然反复的酶切/跑胶/回收会让dna的含量降到无法继续实验……...

千问 · 2009-5-18 01:30:22

用限制酶切目的基因可产生两个末端，其中用一种限制酶切开一个末端，另一种限制酶切开另一个末端；也可以用一种限制酶切开两个末端，这样防止目的基因再次结合。限制酶的识别位点必须是回文序列。...

千问 · 2009-5-18 01:30:22

限制酶就像一把刀一样而DNA就是一个萝卜一种酶就是一把刀不同的酶就是不同的刀当然这儿的刀在萝卜上切的位置不同一个萝卜上随便用几把刀都行的但是为什么一个目的基因需要用到两种（或多种）限制酶，防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环因为DNA切开后它的粘性末端有自我连接的能力当一个酶在一条DNA链上有两处酶切位点...

千问 · 2009-5-18 01:30:22

这句话是这么个意思，如果你用同一种内切酶切，切下来的DNA片段的黏性末端不是一样的么，那两端各自多余的碱基可能配对然后形成自身连接成环。用不同的内切酶黏性末端就不一样，碱基就配不起来啦。...