PCR引物设计问题，求大神！！

显示全部楼层 · 2011-11-10 00:51:08

1.查看你的引物的形成二聚体，错配，cross dimer的△G的值是多少，如果大于-4.5，那么问题不大，另外看是不是3‘端形成了错配等，如果有，能够修改引物长度最好。△G最好不要超过两位数。2.Tm值有差距一般调节引物长度。短的引物总归Tm值相对低。另外，退火的时候酶切位点那一段是不算的哦！他们不结合在链上，楼主这点注意（从你算得60%看你肯定是把前面的酶切位点也算进去了）3.如果引物位置比较灵活的话换一下引物的位置，不过如果是P一段完整基因的话就算了。4.我连分数60多的引物都P出来过，如果你一定要P出来的话，不要太相信电脑的数据，试试看。5.如果引物还是不好，做的时候可以考虑用热启动降落PCR方法。如果有弥散，建议降低镁离子量和...

千问 · 2011-11-10 00:51:08

藏洞...