做pcr，如何确定最佳退火及延伸的时间和温度？

显示全部楼层 · 2012-3-31 19:00:33

延伸一般都是72°时间是根据酶的种类和片段长度决定的退火温度根据引物来决定一般先用55°不行的话再往下降...

千问 · 2012-3-31 19:00:33

退火的目的是为了使引物和DNA单链结结合，所以退火温度一定要低于目的DNA和引物的熔点温度。一般情况下引物的熔点温度为40~70度，熔点温度的高低与引物的大小与G+C的比例有关。延伸的温度取决于DNA聚合酶的最适温度，聚合的错配率，引物的熔点温度。最常使用的延伸温度为72度。但是根据你要扩增的产物与引物还是会有差距。...