我扩增的片段大概1400bp,GC含量较高，用LA Taq可以扩增出来，但有突变，用高保真酶又扩增不出来，怎么办？

显示全部楼层 · 2012-5-3 07:59:30

可用混合酶进行扩增，一般可以挑到无突变的克隆。另外可以控制扩增的次数，你估计一下模板含量，然后用乘以和扩增相关的系数2^(0.7*n)，其中n为扩增次数。这个方法还是比较准确，控制循环次数可以把相差两个Log的DNA扩增到基本相同的含量。你扩增的次数控制在产物总量不要超过500ng（50ul体系）。我喜欢用Pfx（Invitrogen），扩增效率高，突变产物较少。Iproof也可以，产量也不错。...

千问 · 2012-5-3 07:59:30

多扩几次。。。。或者你在taq里面加一点高保证的酶~...