无内含子的基因如何做定量？引物要怎么设计啊？

显示全部楼层 · 2012-4-27 21:27:52

无内含子的基因，你就正常设计定量PCR的引物定量PCR检测基因表达水平时，提取总RNA，DNase酶降解可能存在的DNA，再进行反转录，和定量PCR。如果你担心有DNA的污染，导致定量的结果不准确，可以在DNase消解之后，取一部分样品作为模板，进行定量PCR检测，以确定DNase消解之后，是否有DNA的残留。如果没有，这就表明定量PCR的结果可信；如果有，则说明DNase消解的不彻底，你再优化DNase消解的条件，如增加酶的用量并扩大反应体系、延长反应时间等。...

千问 · 2012-4-27 21:27:52

以上两个说的都对，用dna酶降解了就可以了，暂时没其他方法。...

千问 · 2012-4-27 21:27:52

这个比较麻烦，引物是没法做跨内含子设计的，最好是用DNase充分降解基因组DNA。...