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PCR目的片段为2100BP到3000BP，用哪种酶效果会好点？

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查看11 | 回复3 | 2012-6-19 21:36:02 | 显示全部楼层 |阅读模式
引物计算的Tm值未必适合你的PCR仪，还是要用梯度来一遍，不过如果懒得弄，你就用52度P一次也行。置于哪种酶，我一般要是扩增2000-3000这个长度，就是Taq足矣，我们实验室的Taq是自己做的，因此图便宜都用Taq，也没见什么不良影响。至于Pfu，保真性高一些，可是扩增效率低一点，如果你扩增这个片段用于后续克隆，不能出错，Pfu也挺好，但是你如果仅仅是扩增这个片段为了验证什么别的结果，那么Taq这种便宜量又足的东东，非常合适。...
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千问 | 2012-6-19 21:36:02 | 显示全部楼层
一般的pfu就可以。退火温度尝试45℃和50℃，应该没问题。...
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千问 | 2012-6-19 21:36:02 | 显示全部楼层
可以先做个梯度试试，45-60度。...
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