关于液相色谱法纯化蛋白质

显示全部楼层 · 2012-8-3 23:41:09

四种色谱相比较的话，就看你是纯化什么性质的蛋白质，根据蛋白质与杂质之间的的性质来决定选择哪种层析技术。凝胶：上样量为柱体积的0.5-1%，不要超过2%，是物理方法，填料无吸附作用。要杂质与蛋白质分子量相差较大时才能有效分开。离子交换：通过蛋白的所带电荷不同来纯化的，参考等电点来控制buffer的pH，洗脱过程是低浓度到高浓度，也就是说离子强度增加，蛋白电荷小的就先被洗脱下来。亲和：是特异性吸附，使蛋白带上标签，能结合到填料位点上，通过争夺结合位点来洗脱。疏水：是从高盐至低盐，是看蛋白质与杂志的疏水性来洗脱。四大层析方法各有优缺点，但是只要能纯化出目标蛋白就是好的纯化方法！建议你看下《蛋白质纯化手册》！...

千问 · 2012-8-3 23:41:09

凝胶过滤色谱法：分辨率较高，但是上样量仅为柱体积的1%，而且对流速也有严格的限制离子交换色谱法：根据目的蛋白质表面所含有的氨基酸残基带有的净电荷分离蛋白质，但是分辨率没有凝胶过滤高亲和层析法：根据生物分子的特异性分离目的蛋白，特异性很高，但是配件容易丢失适合含有特异性的标签的或者抗体疏水色谱：根据疏水性来分离蛋白质，缺点是有的蛋白质...