我提取了很多次RNA，测出的OD值260/280都很好,但就是跑胶时就降解。不知怎么搞得！请高人指点！

显示全部楼层 · 2012-8-23 14:02:48

OD值很好只能代表你的纯度高并不能代表你提的完整。所以RNA降解可能是你提的时候就降解了，也可能是跑胶的时候降解的。假设你提取的是完整的RNA，可能出问题的步骤有以下：1.loading buffer ，确定是使用的RNA 专用的，且使用步骤是按说明书来的（有些是需要加热，冷却等步骤）2.电泳时间长，需用的电泳电压不恰当3.电泳液配置，电泳液中可能含RNA酶，将你的样品降解。总之，降解可能是很多原因造成的，我没看到你的电泳图，也不知道你怎么提取得，不好确定到底是什么原因，你可以加我恰QQ272228132，可以讨论下。...

千问 · 2012-8-23 14:02:48

这样说吧，260/280是RNA质量合格的必要条件，但不是充分条件。即使RNA降解成碎片了，260/280的值依然很好，它反映的只是RNA的一个纯度，并不能反映RNA结构的完整。检验结构完整经典的方法就是跑胶，如果降解了，只能说明抽提失败。当然前提是你的电泳器材不能有污染，建议梳子、船、跑胶板之类的耗材要定期清洁（可用0.1%DEPC溶液或20%...

千问 · 2012-8-23 14:02:48

缓冲液最好是鲜配的，放久了会长菌。。电泳槽，梳齿等器具应该做无RNA酶处理，建议使用华越洋的外源RNA酶清除剂，稀释1000倍，浸泡5分钟后使用。提高电压，让电泳时间再短些。。。或者样品里面加RNA酶抑制剂处理。。如果是提取过程中导致的降解，建议：trizol法的，研磨后trizol要足量，液氮要完全覆盖被研磨的样品。试...

千问 · 2012-8-23 14:02:48

配个浓度低的胶，0.5%，提高电压，速战速决。电泳液要新换，loading buffer 也要新换。最近天热，跑之前电泳液最好是凉的，不行的话，在电泳仪的的外面放些凉水，总之让温度降下来点。...