用结核菌素注射冷冻和保存精液其方法简单方便,易于推广.该方法除需要培养基外,仅需要1个液氮容器,10小筒及液氮即可.它较之常用的安瓿,麦杆管或球型器冷存法有冷冻前操作程序少,无需解冻后操作及可选择的人工授精方式多的优点.这种冷存法冷存的精液质量类似麦杆管法,其精子生存力和授精力可与麦杆管,球型器,安瓿法媲美.
到目前为止,已有许多关于改善冷冻保存人体精液的报告.在这些报告中,均采用液化氮,含蛋黄培养基以及甘油.采用含蛋黄培养基已很普遍,但其优点也受到怀疑.最近,蛋黄游离培养基的应用获得成功.冷冻精液可保存于安瓿,麦杆管或球型器中,三种保存形式都需要在冷冻前和解冻后的多次操作程序.本文介绍使用结核菌素注射器冷冻和保存精液.由于注射器可在人工授精时使用,故仅需部分冷冻前的操作程序而无需解冻后的操作.
材料和方法
精液标本取自正常供精者和不育夫妇男方精子正常者.液化后精液与改良Mahadevan冷冻保护培养基混合,该培养基含NaCl 100mM；KCl5.37mM；MgSO4 0.49mM；NaH2PO2H2O 0.32mM;NaHCO3 3095mM；乳酸钙2.46mM；蔗糖50.00mM；甘氨酸133.33mM；葡萄糖5.56mM;HEPES(二羟基二次乙基乙胺乙烷碳酸)20.00mM；甘油2054.00mM和人血浆白蛋白4gm/L.除甘油和人血浆白蛋白外,其余溶剂应被溶解于500ml的蒸馏水中.边搅拦溶液边逐滴加入甘油,最后再逐渐加入人血浆白蛋白.用1N NaOH将pH调整至7.0.再加入双蒸馏水使培养基总量为1升.培养基中甘油的最后浓度为7.5%（wt/vol）.培养基被滤过消毒后,分送于无菌塑料管中加盖,在-20℃下保存.
用10厘米长的结核菌素注射器抽入部分精液冷冻保护培养基的混合液,再用一带针帽的细针或椎形封闭器严密封闭.为防止解冻时封闭物脱落,在注射器内吸入1ml空气,从而允许注射器内容物在解冻时膨胀.用颜色标记注射器的管心部位后,即置注射器于一小筒内,再直接放入贮存液氮的容器中.解冻时,为减少封闭器脱落,先将注射器在室温下放置1分钟,然后再置于温水（25-30℃）5分钟解冻后擦干注射器以防水进入授精套管内.
剩余的精液-冷冻保护培养基混合液被抽入0.2ml的法国麦杆管中.用密闭粉封口后,置麦杆管于小筒中,在缓慢降入液氮容器内的液体之前,先置于稍高于液氮面的液氮蒸气中保留10分钟.解冻时麦杆管置于室温下5分钟即可. |
