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第一问答网»论坛 › 中问网 › 问答 › 随机引物 之RT-PCR急急急急急！！！！！

随机引物 之RT-PCR急急急急急！！！！！

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查看11 | 回复1 | 2009-12-12 20:18:02 | 显示全部楼层 |阅读模式
就是使用许多随机的碱基组合的引物（随机组合丰富），一般6到8个碱基，许多随机引物组成的一套引物组，由于mRNA相对较长，随即引物与它结合的位点较多，从而很快反转录形成cDNA单链。


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千问 | 2009-12-12 20:18:02 | 显示全部楼层
对于真核生物来说，RNA末端有一段保护用的PolyA序列，也就是一长串AAAAAAAAA的碱基，大概十多个碱基，所以我们会用oligdT引物来逆转录而原核类的没有PolyA结构，所以用随机引物来跟RNA碱基互补配对，随机引物就是包含了所有碱基组合的引物（如八聚体的随机引物有4的8次方中序列的引物在里面），RNA加热后变成单链的线性状，这时再降低温度退火（0度），引物就跟RNA配对结合了，然后在40多度的环境下由逆转录酶合成与RNA互补的另一条链，这样就得到cDNA了
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