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血样品被拖入 10 毫升EDTA Vacutainer 管 (Becton Dickinson 、富兰克林湖, NJ), 到哪一个细胞的防腐剂后来被增加。样品被维护在室温而且在 72 小时之内之后处理了收集。 所有的 CTC 评估被做在二中的一中央的实验室 (Immunicon 、 Huntingdon 山谷、 PA 或 IMPATH 预言性的肿瘤学、洛杉矶, 加州) 或在五点叁加学院的中心那CellSearch 系统有 semiautomated 样品准备对 immunomagnetically 的系统和 CellSearch 上皮的细胞装备使表达上皮的细胞附着分子的细胞富足。 (9)隔离的细胞然后以核的酸颜料萤光地被分类4?,6-diamidino-2 phenylindole 的而且分类了单细胞繁殖的抗体特性为白血球 (CD45-allophycocyanin) 和上皮的细胞(cytokeratin 8,18,19 phycoerythrin 的). 确认和计算CTCs 被使用 CellSpotter 分析者 (Immunicon) 做,semiautomated允许 computergenerated 的萤光显微镜使用系统细胞图像的重建.(9) CTCs 被定义当做有核的细胞缺乏 CD45 而且表达 cytokeratin.(8,9) 所有的化验被无法判断忍耐的结果的训练的操作员做了。 |
