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[网络互助]求助骨髓干细胞培养的问题

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0 | 2021-1-8 09:12:28 | 显示全部楼层 |阅读模式

小弟弟一次在这里求帮助，希望从事过细胞培养的兄弟姐妹多多帮助，谢谢了。下面把我的流程详细说下，大家帮忙指点。
　　1，准备器材，细胞房紫外30分，通风15分；
　　2，颈椎脱臼大鼠，浸泡于75%酒精20分钟；
　　3，穿隔离衣进细胞房，取大鼠双侧股骨胫骨，一只取4跟，然后用10ml低糖dmem（Gibco）冲洗骨髓腔，然后1000转离心5分
　　4，去上清，加5ml低糖dmem打散，缓慢贴壁加入事先准备好的已经加了5ml淋巴细胞分离液（Sigma 1077）的离心管，4摄氏度1600转30分钟；
　　5，得到中间层，用吸管小心吸取1ml，至于另一离心管中，加5ml低糖dmem，打散，1000转离心5分钟；去掉上清，再加5mldmem，打散，离心1000转5分钟；
　　6，去掉上清，4ml低糖dmem（本文提到所有低糖dmem已加15%胎牛血清Gibco顶级澳洲），打散，转入25平方厘米培养瓶，37度5%二氧化碳培养箱中；
　　7，48小时首次换液，细胞数目比较多，部分已经变形，后面2-3天换液一次，问题出现了，第一次换液后，细胞绝大部分就变形漂浮。（因为是夏天，培养基就放在室温，大概27，28度这样子）还有就是即使不漂浮，待到培养到2周左右，细胞就会漂浮，死亡，不知道是什么原因~求解答~非常感谢！

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